免疫組化陰性對(duì)照的選擇其實(shí)有明確的黃金法則：?優(yōu)先選基因敲除樣本，沒有的話就用天然低表達(dá)組織?。

一、方案：基因敲除樣本

?操作?：用基因敲除（KO）或敲低（KD）的組織，比如CD4檢測(cè)用CD4-KO小鼠

?優(yōu)勢(shì)?：結(jié)果，能直接排除抗體交叉反應(yīng)

二、備選方案：天然低表達(dá)組織

?操作?：查Human Protein Atlas找目標(biāo)蛋白低表達(dá)的組織

?示例?：PD-L1檢測(cè)用正常肺組織

三、關(guān)鍵操作要點(diǎn)

?同步處理?：和實(shí)驗(yàn)組用同一批固定液、同種修復(fù)方法

?驗(yàn)證?：若陰性對(duì)照顯色，可能是抗體交叉反應(yīng)或封閉不充分

?記錄?：標(biāo)注組織來源和處理?xiàng)l件，方便追溯

四、常見問題

?假陽性?：陰性對(duì)照顯色→排查抗體特異性或封閉步驟

?假陰性?：陰性對(duì)照未顯色→檢查抗體效價(jià)或顯色試劑

?記住?：陰性對(duì)照是免疫組化的"質(zhì)檢員"，選對(duì)樣本、同步處理、定期驗(yàn)證是關(guān)鍵。